Yon filtè fluoresans se yon eleman esansyèl nan mikwoskòp fluoresans. Yon sistèm tipik gen twa filtè debaz: yon filtè eksitasyon, yon filtè emisyon ak yon glas dichroic. Yo souvan pake nan yon kib pou gwoup la mete ansanm nan mikwoskòp la.
Ki jan yon filtè fluoresans travay?
Filtè eksitasyon
Filtè eksitasyon transmèt limyè nan yon longèdonn espesifik ak bloke lòt longèdonn. Yo ka itilize pou pwodwi diferan koulè pa réglage filtè pou pèmèt sèlman yon koulè pase. Filtè eksitasyon yo vini nan de kalite prensipal - filtè pasaj long ak filtè pas band. Eksitasyon an se nòmalman yon filtè bandpass ki pase sèlman longèdonn yo absòbe fliyofò a, kidonk minimize eksitasyon lòt sous fluoresans ak bloke limyè eksitasyon nan bann emisyon fluoresans lan. Kòm montre nan liy ble a nan figi a, BP se 460-495, ki vle di ke li ka sèlman pase nan fluoresans nan 460-495nm.
Li plase nan chemen ekleraj yon mikwoskòp fliyoresan epi li filtre tout longèdonn sous limyè a eksepte ranje eksitasyon fluorofò a. Transmisyon minimòm filtre a dikte klète ak klere nan imaj yo. Yon minimòm de 40% transmisyon pou nenpòt ki filtre eksitasyon rekòmande pou transmisyon an se depreferans> 85%. Pleasant nan filtè eksitasyon an ta dwe antyèman nan seri eksitasyon fluorophore konsa ke longèdonn sant (CWL) nan filtè a se pi pre ke posib nan longèdonn eksitasyon pik fluorophore la. Filtè eksitasyon dansite optik (OD) dikte fènwa imaj background; OD se yon mezi ki jan yon filtre bloke longèdonn yo deyò ranje transmisyon oswa Pleasant. Yo rekòmande yon OD minimòm 3.0 men yon OD 6.0 oswa plis se ideyal.
Filtè Emisyon
Filtè emisyon yo sèvi ak objektif pou pèmèt fliyoresans dezirab ki soti nan echantiyon an rive jwenn detektè a. Yo bloke longèdonn ki pi kout epi yo gen gwo transmisyon pou longèdonn ki pi long yo. Kalite filtre a asosye tou ak yon nimewo, egzanp BA510IF nan figi a (filtè baryè entèferans), deziyasyon sa a refere a longèdonn nan 50% transmisyon maksimòm li yo.
Menm rekòmandasyon yo pou filtè eksitasyon yo se vre pou filtè emisyon: minimòm transmisyon, Pleasant, OD, ak CWL. Yon filtè emisyon ak konbinezon ideyal CWL, transmisyon minimòm ak OD bay imaj ki pi klere posib, ak bloke ki pi pwofon posib, epi asire deteksyon siyal emisyon ki pi fèb yo.
Dichroic glas
Iwa dichroic la mete ant filtè eksitasyon an ak filtè emisyon nan yon ang 45 ° epi li reflete siyal eksitasyon an nan direksyon fluorophore la pandan y ap transmèt siyal emisyon an nan direksyon detektè a. Filtè dichroic ideyal ak splitter gwo bout bwa gen tranzisyon byen file ant refleksyon maksimòm ak transmisyon maksimòm, ak yon refleksyon> 95% pou Pleasant nan filtè eksitasyon an ak yon transmisyon nan> 90% pou Pleasant nan filtè emisyon an. Chwazi filtè a ak longèdonn entèseksyon (λ) fluorophore a nan tèt ou, pou misyon pou minimize limyè ki pèdi ak maksimize rapò siyal-a-bri imaj fluoresan.
Iwa dichroic nan figi sa a se DM505, sa yo rele paske 505 nanomèt se longèdonn nan 50% transmisyon maksimòm pou glas sa a. Koub transmisyon pou glas sa a montre transmisyon segondè pi wo pase 505 nm, yon gout apik nan transmisyon sou bò gòch nan 505 nanomèt, ak reflektivite maksimòm sou bò gòch la nan 505 nanomèt men yo toujou ka gen kèk transmisyon anba a 505 nm.
Ki diferans ki genyen ant filtè pasaj long ak filtè pasaj bann?
Filtè fliyoresan yo ka divize an de kalite: pas long (LP) ak pas band (BP).
Filtè pasaj long transmèt longèdonn long epi bloke sa ki pi kout yo. Longèdonn koupe a se valè a 50% nan transmisyon pik, ak tout longèdonn ki pi wo a koupe-sou yo transmèt pa filtè pasaj long yo. Yo souvan itilize nan miwa dikroik ak filtè emisyon. Longpass filtè yo ta dwe itilize lè aplikasyon an mande pou koleksyon emisyon maksimòm ak lè diskriminasyon espèk pa dezirab oswa nesesè, ki se jeneralman ka a pou sond ki jenere yon sèl espès emèt nan espesimèn ak nivo relativman ba nan otofluoresans background.
Filtè pas band sèlman transmèt yon bann longèdonn sèten, ak bloke lòt moun. Yo redwi crosstalk pa pèmèt sèlman pòsyon ki pi fò nan spectre emisyon fluorophore yo dwe transmèt, diminye bri otofluorescence epi konsa amelyore rapò a siyal-a-bri nan echantiyon segondè otofluorescence background, ki filtè pasaj long pa ka ofri.
Konbyen kalite seri filtre fliyoresan BestScope ka bay?
Gen kèk kalite filtè komen yo enkli filtè ble, vèt ak iltravyolèt. Jan yo montre nan tablo a.
| Filter Set | Filtè eksitasyon | Dichroic glas | Filtè baryè | Longè vag ki ap dirije lanp | Aplikasyon |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Metòd antikò Fluoresan ·Asid zoranj: ADN, RNA ·Auramine: Bacillus Tubercle ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Metòd antikò Fluoresan ·Propidium yodide: ADN · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | ·Oto-fluoresans obsèvasyon ·DAPI: Tach ADN ·Hoechest 332528, 33342: itilize pou tach kwomozòm |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Katekolamin ·5-hydroxy tryptamine ·Tetracycline: skelèt, dan |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Ansanm filtre ki itilize nan akizisyon fliyoresan yo fèt alantou gwo longèdonn yo itilize nan aplikasyon fliyoresan, ki baze sou fliyofò ki pi itilize yo. Pou rezon sa a, yo rele yo tou apre fluorophore yo gen entansyon pou D, tankou DAPI (ble), FITC (vèt) oswa TRITC (wouj) kib filtre.
| Filter Set | Filtè eksitasyon | Dichroic glas | Filtè baryè | Longè vag ki ap dirije lanp |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Wouj | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Ki jan ou chwazi yon filtè fluoresans?
1. Prensip la nan chwazi filtè fluoresans se kite limyè fluoresans/emisyon an pase nan fen D 'otank posib, ak konplètman bloke limyè a eksitasyon an menm tan an, konsa tankou jwenn pi gwo rapò siyal-a-bri. Espesyalman pou aplikasyon eksitasyon multiphoton ak mikwoskòp refleksyon entèn total, bri fèb la pral lakòz tou gwo entèferans nan efè D ', kidonk kondisyon an pou rapò siyal bri pi wo.
2. Konnen eksitasyon ak emisyon spectre fliyofò a. Pou konstwi yon seri filtre fliyoresan ki jenere yon imaj ki gen bon jan kalite, ki gen anpil kontras ak yon background nwa, eksitasyon ak filtè emisyon yo ta dwe reyalize transmisyon segondè ak rid pasaj minim sou rejyon yo ki koresponn ak pik eksitasyon fluorophore oswa emisyon.
3. Konsidere durability filtè fluoresans yo. Filtè sa yo dwe enpèmeyab nan sous limyè entans ki jenere limyè iltravyolèt (UV) ki ta ka mennen nan "bouche", patikilyèman nan filtè eksitasyon an paske li sibi entansite a plen nan sous la lumières.
Diferan imaj Fluoresan echantiyon yo
Resous yo kolekte epi òganize sou Entènèt, epi yo itilize sèlman pou aprann ak kominikasyon. Si gen nenpòt vyolasyon, tanpri kontakte nou pou efase.
Tan poste: Dec-09-2022